Скачать

Ампульное производство гентамицина сульфата

Министерство общего и профессионального образования Российской Федерации.

Уральский Государственный Технический Университет – УПИ.

Отчет по производственной практике:

Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата

Выполнил:

Студент гр. Х-349

Покровский П.В.

Проверил:

Екатеринбург

2001г.

Содержание

1. Введение 3

2. Химическая схема производства 3

3. Изложение технологического процесса 3

3.1. Приготовление посевного материала на агаризованной среде 3

4. Приготовление агаризованной питательной среды 4

5.Фармакологические свойства гентамицина сульфата 5

6. Изложение технологического процесса 6

6.1. Подготовка производственных помещений 6

6.2. Подготовка воздуха для "чистых" помещений 6

7. Приготовление воды 7

7.1. Приготовление воды очищенной 7

7.2. Приготовление воды для инъекций 7

8. Подготовка ампул 8

9. Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата 8

9.1.Растворение субстанции гентамицина сульфата 8

9.2. Подготовка установки стерилизующей фильтрации 9

10. Предварительная фильтрация 10

11. Стерилизующая фильтрация 4%-го раствора гентамицина

сульфата 10

11.1. Подготовка установки стерилизующей фильтрации 11

11.2. Проведение процесса стерилизующей фильтрации 11

12. Розлив препарата в ампулы и запайка 12

12.1. Подготовка установки розлива и запайки 12

12.2. Проведение процесса розлива и запайки 12

13. Стерилизация ампул с препаратом 13

14. Проверка ампул на герметичность 13

15. Просмотр ампул 13

16. Оформление готовой продукции 13

17. Список использованной литературы 14

1. Введение

Гентамицин сульфат представляет собой смесь гентамицинов С₁,С₂,С₃ продуцируемых Micromonospora purpurea и обладающих антимикробным действием.

Препарат представляет собой пористую массу или порошок белого цвета с кремовым оттенком. Гигроскопичен, слегка растворим в воде, практически нерастворим в 95% спирте, хлороформе, эфире.

Препарат дает характерную реакцию на сульфаты.

Содержание сульфатов в препарате в пересчете на сухое вещество должно быть от 31 до 34%.

2.Химическая схема производства

В основу положен метод ионообменной хроматографии.

1. Сорбция гентамицина катионитом КБ-2 из водного раствора.

2. Вымывание гентамициноподобных примесей 0.043Н водным раствором аммиака.

3. Десорбция гентамицина 5% водным раствором аммиака.

3. Изложение технологического процесса.

3.1.Приготовление посевного материала на агаризованной среде.

Исходной в производстве является культура Micromonospora purpurea штамм ВНИИА-72, выращенной из почвенной культуры в пробирках на скошенной агаризованной среде Гаузе-1.

Загружено:

1. Споровая суспензия – 10 см³.

2. Агар микробиологический – 50 гр.

3. Калий азотнокислый – 2.5 гр.

4. Калий фосфорнокислый двузамещенный – 1.25гр.

5. Магний сернокислый 7-водный – 1.25 гр.

6. Натрий хлористый

• для агаризованных сред – 1.25 гр

• для ферментационных сред – 18.0 гр.

7. Железо сернокислое, 7-водное – 0.025 гр.

8. Крахмал картофельный пищевой

• для агаризованных сред – 50 гр.

• для посевных сред – 66 гр.

• для ферментационных сред – 300 гр.

9. Экстракт кукурузный сгущенный – 13.75 гр.

10. Мука соевая дезодорированная необезжиренная

• для посевных сред – 27.5 гр.

• для ферментационных сред – 180 гр.

11. Мел химически осажденный

• для посевных сред – 8.25 гр.

• для ферментационных сред – 42.00 гр.

12. Аммоний сернокислый – 18.00 гр.

13. Кобальт хлористый без никеля 6-водный – 0.0048 гр.

14. Почва садово-огородная – 10 см³.

15. Вода питьевая

• для агаризованных сред – до 2500 см³.

• для посевных сред – до 2750 см³.

• для ферментационных сред – до 6000см³.

4.Приготовление агаризованной питательной среды

Для выращивания продуцента гентамицина используется агаризованная среда Гаузе-1 следующего состава (%):

Калий азотнокислый – 0.10;

Калий фосфорнокислый двузамещенный – 0.05;

Магний сернокислый – 0.05;

Натрий хлористый – 0.05;

Железо (II)-сернокислое – 0.05;

Крахмал картофельный – 2.0;

Агар – 2.0;

Вода питьевая – до расчетного объема;

pH после стерилизации – 7.0-7.4.

Посевной материал, полученный в маточной колбе должен удовлетворять следующим требованиям. Внешний вид: средней густот или густая биомасса хлопьевидного мицелия, равномерно распределенного в среде. При взбалтывании мицелий обволакивает стенки колб. При отстаивании не расщепляется и не оседает. Посевной материал про мере развития образует налет, который изменяется от бежевого до сероватого, грязно-розового. Микроскопия: сетка рыхлых микроколоний, гифы длинные или средней длины, волнистые. Протоплазма базофильная, иногда в виде пунктира. Постороння микрофлора отсутствует.

5.Фармакологические свойства гентамицина сульфата

Гентамицина сульфат – антибиотик из группы аминогликозидоов, характеризующийся щироким спектром антимикробного действия.

Активен в отношении большинства грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов: синегнойной и кишечной палочек, тифо-паратифозной и дизентерийной бактерий, в том чеисле множественно устойчивого стафилококка.

По степени активности в отношении этих микроорганизмов превосходит канамицин, неомицин, мономицин.

Наиболее важной особенностью гентамицина является его активность в отношении штаммов синегнойной палочки. Для подавления роста большинства штаммов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов требуется концентрация не более 4 мкгсм³.

На микробную клетку гентамицин действует бактерицидно, подавляя синтез белка в размножающихся клетках.

При приеме внутрь гентамицин практически не всасывается. Основной метод введения антибиотика – парентеральный (внутримышечный и внутривенный).

Гентамицина сульфат применяется при лечении тяжелых гнойно-септических заболеваний (сепсис, менингит, перитонит, септический эндокрит), тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний органов дыхания (пневмония, эмпиелоплевра, абсцесс легкого), инфекций почек и мочевыводящих путей (пиелонефрит, цистит, уретрит), инфицированных ожогов при нечувствительности к другим антибактериальным препаратам.

Нормативные требования к упаковке, маркировке, транспортированию, условиям хранения и сроки годности препарата.

Препарат разливают по 2 см³ в ампулы из нейтрального стекла НС-1 или НС-3 по ОСТ 64-2-485-85.

По 10 ампул помещают в коробки из картона для потребительской тары марки хромовой или хром-эрзац по ГОСТ 7933-89 с вкладыщем из бумаги пачечной по ГОСТ 6290-74. В каждую коробку вкладывается нож для вскрытия ампул по ТУ-400-6-169-85 или скарификатор ампульный керамический по ТУ-9432-001-07610517-97, вкладыш.

Групповая упаковка и транспортная тара в соответствии с ГОСТ-17768-90.

На каждой ампуле быстрозакрепляющейся краской по ТУ-64-7-88-86 указывают название препарата, концентрацию, объем препарата номер серии.

При получении гентамицина сульфата 4% для инъекцтй химическая схема производства не предусмотрена.

6.Изложение технологического процесса

6.1.Подготовка производственных помещений.

Участок готовых лекарственных сред (ГЛС) по классу чистоты разделяют на:

• блок мойки ампул – 3-й класс чистоты (В);

• блок стерилизации фильтров – 2-й класс чистоты (А,В);

• блок проверки ампул на герметичность – 4-й класс чистоты;

• блок просмотра ампул, маркировки ампул, упаковки – 4-й класс чистоты;

Подготовка помещений делится на ежедневную и генеральную.

Ежедневную подготовку помещений 1-го и 2-го классов чистоты проводят перед началом и после окончания каждой смены влажным способом. Стены, двери и другие поверхности помещения протирают поролоновой губкой, обильно смоченной раствором перекиси водорода (массовая доля 3%).

После окончания обработки помещение освобождают от персонала и включают настенные бактерицидные лампы на 2 часа. Не менее чем за 30 минут включают проточную вентиляцию. В случае обнаружения в воздухе помещения грибков, массовую долю перекиси водорода увеличивают до 4%, а при наличии спорообразующей микрофлоры – до 6%.

Если в течении месяца при систематическом использовании указанного раствора состав воздушной среды помещения соответствует требуемому классу чистоты, то массовую долю перекиси водорода в растворе уменьшают до 1%.

Ежедневную подготовку производственных помещений 3-го и 4-го классов чистоты проводят аналогичным образом раствором перекиси водорода (1%) с моющим средством.

Генеральную подготовку помещений 1-го и 2-го классов чистоты проводят влажным способом один раз в 5-6 дней. Стены, двери, потолки и другие поверхности орошают из распылителя 6%-ным раствором перекиси водорода с моющим средством из расчета 150-200 см³/м². После окончания орошения помещение закрывают на 30-40 минут, после чего удаляют избыток раствора.

После окончания обработки включают бактерицидные лампы на 10-12 часов. Не менее, чем за 30 минут до окончания обработки включают проточную вентиляцию.

Генеральную подготовку помещения 3 и 4 классов чистоты проводят раствором перекиси водорода (3%) с моющим средством. Стены, двери и другие поверхности помещения протирают губкой из расчета 100-150 см³/м².

Определение микробной контаминации помещения и оборудования и механических частиц в воздухе проверяют выборочно два раза в неделю во время производственного процесса и 1 раз в две недели непосредственно после обработки помещений и оборудования дезинфицирующим раствором. Результаты контроля заносят в журнал.

6.2.Подготовка воздуха для "чистых" помещений.

Воздух, подаваемый в чистые помещений, подвергается трехступенчатой очистке.

Система проточной вентиляции состоит из следующих элементов:

• приточной камеры;

• фильтров первой ступени;

• калорифера;

• вентилятора;

• воздуховодов;

• гермоклапанов;

• фильтров второй ступени;

• фильтров третьей ступени;

На первой ступени применяют ячейковые фильтры, типа ФЯП, на второй – фильтры тонкой очистки, типа ФТО, на третьей – ячейковые фильтры Нера.

В системе подготовки воздуха используются воздуховоды, клапаны и другие элементы из следующих материалов:

• из стали 3 – от калорифера до фильтров второй ступени;

• из оцинкованной стали – от фильтров второй ступени до фильтров 3-й ступени;

С целью регулирования расхода воздуха, подаваемоого в рабочую зону "чистых" помещений со скоростью 0.3-0.6 м/с, устанавливаются гермоклапаны с ручным приводом. Кратность воздухообмена в "чистых" помещениях 2-го и 3-го классов чистоты устанавливаются в соответствии с МУ 42-5-1-93.

Производительность местной вытяжной вентиляции участка ГЛС регулируется таким образом, чтобы она составляла 80-90% от производственной системы проточной вентиляции. Очистку вытяжного воздуха осуществляют через фильтры тонкой очистки.

7.Приготовление воды

Процесс приготовления воды включает следующие стадии:

• приготовление воды очищенной;

• приготовление воды для инъекций;

7.1.Приготовление воды очищенной

Очищенную воду получают в дистилляторе и собирают в аппаратах-сборниках вместимостью 0.25 м³. каждый. Отбирают пробу и определяют ее соответствии предъявляемым требованиям.

7.2.Приготовление воды для инъекций

Очищенную воду из аппарата-сборника с помощью сжатого воздуха давлением 0.14-0.22 Мпа передают на установку получения воды для инъекций (УВ), предназначенную для многоступенчатой очистки воды от примесей. Удельное сопротивление воды для инъекций должно составлять 2-10 МОм. В результат очистки получают воду для инъекций, которую собирают в приемниках-емкостях вместимостью каждый по 0.07 м³. Полученная вода для инъекция должна соответствовать требованиям ФС 42-2620-97. Из приемных емкостей воду с помощью сжатого воздуха давлением 0.14-0.22 МПа передают в моечную машину для окончательного ополаскивания полости ампул. Из установки получения воды для инъекций (УВИ) отбирают воду для приготовления 4%-го раствора гентамицина сульфата.

Не реже одного раза в две недели проводят полный химический анализ воды для инъекций.

8.Подготовка ампул

Ампулы являются материалом первичной упаковки и должны пройти все виды обработки согласно нормам и правилам производства инъекционных препаратов.

Исходные ампулы вместимостью 2 см³ предварительно отбраковывают, затем замачивают в мыльно-содовом растворе и выдерживают в течение 3 часов. После окончания выдержки ампулы ополаскивают питьевой водой и передают на мойку участка ГЛС.

Мойку ампул осуществляют в моечной машине (ММ) шприцевым методов с однократной загрузкой (54) ампулы в соответствии с выбранной программой.

С помощью моечной машины осуществляют внутреннюю мойку ампул водой очищенной, паром и водой для инъекция и наружного ополаскивания очищенной водой в течении 10-15 с .

Давление сжатого воздуха, пара и воды должно быть не менее 0.14 МПа.

Из приемных емкостей воду для инъекций с помощью сжатого воздуха давлением 0.14 Мпа подают в моечную машину для окончательного ополаскивания внутренней полости ампул.

После мойки ампулы укладываются в кассеты и передаются на стерилизацию. Стерилизация осуществляется сухожаровым способом при температуре 120 градусов в течение 60 минут.

После стерилизации остывшие ампулы выборочнуо контролируют на содрежание механических частиц. После проведения контроля ампулы передаются на установку розлива и запайки (УРЗ)

9.Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата.

Процесс получения 4%-го раствора гентамицина сульфата включает следующие основные операции:

• растворение субстанции гентамицина сульфата;

• подготовка установки стерилизации фильтров;

• предварительная фильтрация.

9.1.Растворение субстанции гентамицина сульфата.

В колбу (КВ-1) вместимостью 0.5 дм³ из установки получения воды для инъекций с помощью шприца заливают воду для инъекций в объеме 200 см³. Колбу помещают на магнитную мешалку. При перемешивании загружают стабилизаторы-наполнители в количестве:

• натрий пиросернокислый – 1.6 гр;

• трилон Б – 0.05 гр.

Перемешивают до полного растворения. После этого загружают субстанцию гентамицина сульфата в количестве 20 гр и перемешивают в течение 5-10 минут. Затем доводят объем раствора в колбе до 335.4 см³ водой для инъекций.

Израсходовано на стадии суммарно

Получено на стадии суммарно:

9.2.Подготовка установки стерилизующей фильтрации.

Процесс предварительной фильтрации проводят на установке стерилизующей фильтрации (УСФ-1) в ламинарном боксе (ЛБ-1).

Фильтрующим материалом служат мембраны "Миллипор" с диаметром пор 0.45 мкм.

Перед началом работы проверку целостности мембран и герметичность установки проводят согласно технологическим инструкциям по проведению стерилизующей фильтрации. После этого собранный фильтр стерилизуют в автоклаве при температуре 120^о в течении 30 минут и повторно проводят проверку на целостность мембран и герметичность установки. Она должна быть герметична.

10.Предварительная фильтрация.

К верхней резиновой трубке фильтра подсоединяют снабженную монтажом бутыль вместимостью 0.5 дм³. с раствором гентамицина сульфата. К нижней трубке фильтра подсоединяют стерильную бутыль вместимостью 1 дм³. С помощью сжатого воздуха создают давление 0.02Мпа и подают раствор на фильтрацию.

После расходования жидкости в бутыли на ее место устанавливается другая бутыль вместимостью 1 дм³ с водой для инъекций. С помощью сжатого воздуха в бутыли создается давление 0.02 Мпа и вытесняются остатки раствора гентамицина сульфата. Резиновая трубка пережимается зажимом Кохера и бутыль передается на стадию стерилизующей фильтрации гентамицина сульфата. Выход составляет 97%.

11.Стерилизующая фильтрация 4%-го раствора гентамицина сульфата.

Израсходовано на стадии суммарно:

Полупродукт – 4% -й раствор гентамицина сульфата

Содержание основного вещества - 40000 мкг/см³

Израсходовано:

грамм – 325

грамм основного вещества – 13.00

объем, дм³ – 0.325

Получено на стадии суммарно:

Полупродукт – стерильный 4%-й раствор гентамицина сульфата.

Содержание основного вещества – 40000 мкг/см³.

Получено:

грамм – 308

грамм основного вещества – 0.32

объем, дм³ – 0.008

Б. Потери 4%-го раствора гентамицина сульфата после предварительной и стерилизующей фильтрации

Содержание основного в-ва – 40000 мкг/см³.

Получено:

грамм – 8

грамм основного вещества – 0.32

объем, дм³ – 0.008

Пробы 4%-го раствора гентамицина сульфата на анализ:

Содержание основного вещества – 40000 мкг/см³

Получено:

грамм – 9

грамм основного в-ва – 0.36

объем, дм³ – 0.009

Итого:

грамм – 325

грамм основного вещества – 0.36

объем, дм³ – 0.325

Процесс стерилизации включает в себя следующие основные стадии:

• подготовка установки стерилизующей фильтрации;

• проведение процесса стерилизующей фильтрации.

11.1.Подготовка установки стерилизующей фильтрации

Фильтрующим материалом в фиьлтрах служат мембраны "Миллипор" с диаметром пор 0.22 мкм.

11.2.Проведение процесса стерилизующей фильтрации

После окончания процесса отбирают с соблюдением асептики пробы для определения стерильности, механических включений и концентрации активного компонента, затем передают бутыль со стерильным 4%-ным раствором гентамицина сульфата на стадию розлива препарата в ампулы.

Полученный 4%-го раствор гентамицина сульфата должен быть стерильным и не содержать механических включений. Активность раствора должна составлять 40000. Результаты анализа отражают в технологическом журнале.

Выход на этой стадии составляет 91.7%.

Параметры режима и безопасности технологического процесса

12.Розлив препарата в ампулы и запайка

Полупродукт – стерильный 4%-й раствор гентамицина сульфата

Содержание основного вещества, % - 40000 мкг/см³

Израсходовано, гр. – 308

Грамм основного вещества – 12.32

Объем, дм³ – 0.308

Ампулы – 139 штук

Процесс розлива препарата в ампулы включает следующие основные операции:

• подготовка установки розлива и запайки;

• проведение процесса розлива и запайки.

12.1.Подготовка установки розлива и запайки

Подготовку установки розлива и запайки проводят в следующей последовательности:

• протирают наружную часть установки безворсовой тканью, смоченной раствором этилового спирта объемной доли 76%, профильтрованной через мембранный фильтра с диаметром пор 0.45 мкм;

• промывают дозатор путем прокачки водой для инъекций;

• заполняют дозатор этиловым спиртом, профильтрованным через мембранный фильтр с диаметром пор 0.22 мкм и оставляют на 1.5-2 часа.

Перед началом работы спирт сливают путем прокачки и затем промывают с соблюдением асептики установку.

12.2.Проведение процесса розлива и запайки

После завершения подготовки операций включают установку и зажигают горелки. Затем стерильно подсоединяют к штуцеру дозатор бутыли со стерильным 4%-ным раствором гентамицина сульфата, снабженную монтажом.

В момент подсоединения на расстоянии 0.5 м от штуцера дозатора ставят зажженную спиртовую горелку.

Кассету со стерильными ампулами устанавливают на наклоненный лоток. Ампулы, скатываясь по наклонной плоскости заполняют поворотный стол. При образовании заторов включается вибратор. Процесс розлива и запайки проводится в токе азота. В процесса работы установки контролируется объем дозирования в ампулы, давление кислорода, пропана, азота. В каждую ампулу разливается по 2.15 см³ препарата. Результаты контроля вносятся в технологический журнал. Ампулы, выходя из механизма подачи, заполняют пустую кассету, заполненную кассету передают на стерилизацию, а на ее место ставят пустую.

После завершения работы по розливу и запайке ампул дозатор промывают водой для инъекций, заполняют этиловым спиртом. Полученную серию ампул маркируют и анализируют на содержание примесеей.

Выход на данной стадии составляет 90.9%.

13.Стерилизация ампул с препаратом

Стерилизация ампул с препаратом осуществляется в автоклаве проходном при температуре 120 ^оС и давлении 0.12 МПа в течении 30 минут.

14.Проверка ампул на герметичность

После стерилизации ампулы опускают в ванну с водой, подкрашенной 0.0005% раствором метиленового синего, перемешивают ампулы в течении 5 минут, переносят в ванную с питьевой водой для ополаскивания. Ампулы с препаратом должны быть герметичны.

15.Просмотр ампул

Непосредственно перед просмотром ампулы промывают в горячей воде и ополаскивают. Ампулы после визуального осмотра переносят в инспекционную машину и просматривают на белом и черном фонах.

Отбраковку готового продукта осуществляют по следующим показателям:

• наличие механических включений;

• наличие нагара на капилляре ампулы;

• наличие трещин.

От просмотренной партии отбирают 15% ампул для проведение анализа на соответствие требованиям ФС 42-3709-99. Кассеты, прошедшие контроль, передают на маркирование. Выход на данной стадии составляет 90.2%.

16.Оформление готовой продукции

Процесс оформления включает в себя следующие операции:

• маркировка ампул;

• упаковка ампул во вторичную тару;

• контрольное хранение;

• хранение готовой продукции.

1. На каждой ампуле быстрозакрепляющейся краской наносят надпись, в которой указано название препарата, его концентрация, номер серии.

2. По 10 ампул упаковывают в коробки из картона и лист-вкладыш. На этикетке указывают название, предприятие-изготовитель, товарный знак, штрих-код, способ применения.

3. Контрольное хранение проводят при температуре 6^оС в течение 14 суток до получения результатов анализа готового продукта.

4. Упакованные в транспортную тару ампулы с препаратом хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре.

Выход на данной стадии составляет 83.3%.

17.Список использованной литературы

1. Регламент "Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата"

2. Регламент "Ампульное производство 4%-го раствора гентамицина сульфата"